Team:Paris Saclay/Notebook/August/12

From 2013.igem.org

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Used quantities :  
Used quantities :  
* Pfnr in PSB1C3 (Bba_K1155000) :  
* Pfnr in PSB1C3 (Bba_K1155000) :  
-
** Buffer : 5µL
+
** Buffer FD : 5µL
** H2O : 38µL
** H2O : 38µL
** Pfnr : 5µL
** Pfnr : 5µL
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* RBS-LacZ-Term in PSB1C3 (Bba_K1155007) :  
* RBS-LacZ-Term in PSB1C3 (Bba_K1155007) :  
-
** Buffer : 5µL  
+
** Buffer FD : 5µL  
** H2O : 23µL
** H2O : 23µL
** RBS-LacZ-Term : 20µL  
** RBS-LacZ-Term : 20µL  
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* RBS-AmilCP-Term in PSB1C3 (Bba_K1155003) :  
* RBS-AmilCP-Term in PSB1C3 (Bba_K1155003) :  
-
** Buffer : 5µL
+
** Buffer FD : 5µL
** H2O : 33µL
** H2O : 33µL
** RBS-AmilCP-Term : 10µL  
** RBS-AmilCP-Term : 10µL  

Revision as of 21:49, 12 August 2013

Contents

Notebook : August 12

Lab work

A - Aerobic/Anaerobic regulation system

Obtaining Pfnr_RBS-LacZ-Term in PSB1C3

1 - Digestion of Bba_K1155000, Bba_K1155007 and Bba_K1155003

Anaïs, Nadia, XiaoJing

Protocol : digestion

Used quantities :

  • Pfnr in PSB1C3 (Bba_K1155000) :
    • Buffer FD : 5µL
    • H2O : 38µL
    • Pfnr : 5µL
    • SpeI : 1µL
    • PstI : 1µL
  • RBS-LacZ-Term in PSB1C3 (Bba_K1155007) :
    • Buffer FD : 5µL
    • H2O : 23µL
    • RBS-LacZ-Term : 20µL
    • XBal : 1µL
    • PstI : 1µL
  • RBS-AmilCP-Term in PSB1C3 (Bba_K1155003) :
    • Buffer FD : 5µL
    • H2O : 33µL
    • RBS-AmilCP-Term : 10µL
    • XBal : 1µL
    • PstI : 1µL

2 - Electrophoresis of digestion pieces

We gonna check if the digestion was good by control the size of digestion pieces.

Psdigestion12.jpg
  • Well 1 : 6µL DNA Ladder
  • Well 2 : 5µL of digested Bba_K1155000+1µl of 6X loading dy
  • Well 3 : 5µL of digested Bba_K1155007+1µl of 6X loading dy
  • Well 4 : 5µL of digested Bba_K1155003+1µl of 6X loading dy
  • Gel : 0.8%

Expected sizes :

  • RBS_LacZ_Term : 3500 kb
  • RBS_AmilCP_Term :
  • PSB1C3 :
We can't see any band for Bba_K1155000 digestion. We just do it again and let it in the fridge over night. 

...