"

From 2013.igem.org

Solutions, Milieux et boîtes de Pétri

Antibiotiques

Carbénicilline: Mettre 150 mg de Carbénicilline dans 15 mL d'eau distillée (10 mg par mL).
Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.
Utiliser 1 µL de Carbénicilline pour 1 mL de solution.

Kanamycine: Mettre 750 mg de Kanamycine dans 15 mL d'eau distillée (50 mg par mL).
Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.
Utiliser 1 µL de Kanamycine pour 1 mL de solution.

Chloramphénicole: Mettre 525 mg de Chloramphénicole dans 15 mL d'éthanol (35 mg par mL).
Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.
Utiliser 25 µL de Chloramphénicole pour 1 mL de solution.

La carbénicilline inhibe la synthèse de paroi bactérienne, la kanamycine interfère avec la traduction des ARNm et le chloramphénicole inhibe l'activité peptidyl transférase du ribosome.

LB et LB Agar

Mélanger 20 g de LB Broth avec 1L d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver.
Mélanger 17,5 g de LB Agar avec 500 mL d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver.

CaCl2 et CaCl2+glycérol

Tris HCl (50 mL à 1M, pH=7,5)

Dissoudre 4,6g de Trisbase dans 30 mL d'eau distillée.
Ajuster le pH avec du HCl concentré (~4 mL) jusqu'à pH=7,5.
Compléter avec de l'eau distillée jusqu'à 50 mL puis mettre à autoclaver.
Si la solution a une coloration jaune, recommencer avec du Trisbase de meilleur qualité.
Le TrisHCl est utilisé pour stocker l'ADN.