Team:UT Dallas/week10

From 2013.igem.org

9/6

<a name="h.dcjtl44dtu3g"></a>Replate

<a name="h.h800z81zla6t"></a>i5-65-1→ 0 colonies

<a name="h.xj5tqbmludtu"></a>i5-65-2→

<a name="h.c3617rvsgk1l"></a>i5-65-3→ 1 colonie→ picked 1 → i5-65-21 [CPM-RBS-fruR]

<a name="h.bwqabji6jwc4"></a>i5-65-4(+control)--> 0 colonies

<a name="h.tcrkgj9oc83n"></a>i5-65-8→ TMTC (thrown out)

<a name="h.8mp81ekrli4g"></a>i5-65-9 → TMTC (thrown out)

<a name="h.9tcb2t7ix06p"></a>

<a name="h.kow50yy73plz"></a>9/7

<a name="h.hl2v2nys9c0a"></a>Miniprep/Nanodrop

<a name="h.mfry0awhcdf"></a>i5-65-11→ 72.3

<a name="h.zi2zaoxyn7vq"></a>i5-65-12→ 87.5

<a name="h.bwl7gyzp7sh"></a>i5-65-13→67.9

<a name="h.pzogamj43ju0"></a>i5-65-14→72.4

<a name="h.39ezzb1sdzf"></a>

<a name="h.83eywhl33sv6"></a>i5-65-17→73.1 [pFru-RBS-GFP]

<a name="h.1vj2m4o26k3"></a>i5-65-18→78.4 [pFru-RBS-GFP]

<a name="h.oql4srbibq8"></a>i5-65-19→59.5 [TT (Chlora)]

<a name="h.xbcq5i6lgysf"></a>i5-65-20→1.4 [TT (Chlora)]

<a name="h.yocgpr4ye8e9"></a>

<a name="h.6ic1k53t3ffd"></a>PCR of Dec (Mutation)

<a name="h.74ln39nd7akg"></a>

<a href="#" name="95df475fc7f69ad7b6413b62ab5be4bafe8d3192"></a><a href="#" name="117"></a><tbody></tbody>

<a name="h.86fd4gl633vx"></a> 

<a name="h.sxpnx3rk0mpu"></a>i5-53-1

<a name="h.cbxog75sw64g"></a>DNA

<a name="h.un2cdzqm8w45"></a>1

<a name="h.yksievm4szkj"></a>F

<a name="h.peiacrsx3uaf"></a>2.5

<a name="h.76exqa3kriqp"></a>R

<a name="h.tnoa72vi6ru0"></a>2.5

<a name="h.ssuzq4jxqldo"></a>Q5

<a name="h.93itp86uxf5j"></a>25

<a name="h.1vdp87q343gf"></a>Water

<a name="h.ebt5purjfdz8"></a>19

<a name="h.5iwkwuct75z6"></a>Total

<a name="h.kso6bv8mx4up"></a>50

<a name="h.ni5mj4pk5i27"></a> 

<a name="h.45exh2mtb24d"></a>i5-56-1

<a name="h.ap8h6qwwke06"></a>

<a name="h.l1vwfvt45pgg"></a>from glycerol stock

<a name="h.fvh63avh48fw"></a>i5-30-9 pScr-RBS-GFP→ i5-66-1

<a name="h.nsgb1tssuxgl"></a>i5-30-1→ pFru-RBS-GFP→ i5-66-2

<a name="h.skabbpbhbhs"></a>i5-25-7 → CPM → i5-66-3

<a name="h.hiel5idtoo2e"></a>- control

<a name="h.3abtdg3b8irh"></a>

<a name="h.5ck9lqxscr0u"></a>Transformation

<a name="h.2b1kbm889vf6"></a>i5-65-20→ i5-67-1→ 0 colonies

<a name="h.8tkllq564w9"></a>i5-65-19→ i5-67-2→ 50+ colonies→ picked 3 → i5-67-8 & i5-67-9 & i5-67-10

<a name="h.6hlshc9ugon1"></a>

<a name="h.pvv9y19asef2"></a>Digestion

<a name="h.iqum7etbhdyp"></a>

<a href="#" name="de0e2a13ed807d9bc699daeb02a819fa0382557e"></a><a href="#" name="118"></a><tbody></tbody>

<a name="h.yx0pj7qauuky"></a> 

<a name="h.kk50svw56qxg"></a>i5-56-2

<a name="h.ei6vlgjkt3pu"></a>i5-65-12

<a name="h.aad0on6ou10p"></a>i5-65-14

<a name="h.z30ybtygtu11"></a>DNA

<a name="h.6gsw31xnjkd"></a>30

<a name="h.49a82qllgy69"></a>30

<a name="h.nwthsblq3ntf"></a>30

<a name="h.sxva93mp5iue"></a>Buffer

<a name="h.p78y3r1yt98b"></a>5

<a name="h.jca18w92yr9m"></a>5

<a name="h.51e591xy70ed"></a>5

<a name="h.y92focsy1jdu"></a>Water

<a name="h.9xkl01yj0r11"></a>13

<a name="h.i9kg7x8qd6ed"></a>13

<a name="h.9vpmqk9wn2ch"></a>13

<a name="h.ulsp2kzf1i1s"></a>E

<a name="h.6i8jdno17ra"></a>1

<a name="h.iaxsdgdfsx3q"></a>1

<a name="h.jvashews8npw"></a>1

<a name="h.p4aq5u6dejzv"></a>S

<a name="h.mtk2q1h4y525"></a>0

<a name="h.t3x67nwaiqg6"></a>0

<a name="h.q16b319x6d9y"></a>1

<a name="h.7l67riikepue"></a>X

<a name="h.o757ps5uspxy"></a>1

<a name="h.az16f2xs792r"></a>1

<a name="h.w6w83rmhld9w"></a>0

<a name="h.5j0eyk1sxwmz"></a>Total

<a name="h.u4psq51nvng5"></a>50

<a name="h.jcbypzz2mmbi"></a>50

<a name="h.pe2h6ww4pzzj"></a>50

<a name="h.w9r93post9xg"></a>

<a name="h.tvq2zghbb8pi"></a>Gel Extraction

<a name="h.6dkm09lnfplr"></a>RBS → i5-67-3→ 18.9

<a name="h.e9axn9iv9q3o"></a>ComB→ i5-67-4→ 11.9

<a name="h.iqsgxe6pxknu"></a>ComC→ i5-67-5→ 30

<a name="h.o2dbxztix1to"></a>

<a name="h.48jqtddtn4b6"></a>Digestion (Dex mutation)

<a name="h.w2p21jcdl5ro"></a>

<a href="#" name="85062b40f7f3726491c4fc3a30dba6415505f0d3"></a><a href="#" name="119"></a><tbody></tbody>

<a name="h.86wtwrdmubzo"></a> 

<a name="h.cw97vjurwiyc"></a>pCR product

<a name="h.wgzjm8mou4t0"></a>Dex

<a name="h.om527tnui5ua"></a>DNA

<a name="h.70mgwl1ixqgv"></a>30

<a name="h.3iwfy69def1z"></a>30

<a name="h.15ee0xguabb6"></a>Buffer

<a name="h.n4vvo0xpbnrk"></a>5

<a name="h.ftmauiv3ezhh"></a>5

<a name="h.84ciz89ae8b1"></a>AfIII

<a name="h.n7jaud6eeqdb"></a>2.5

<a name="h.xug7aykdg2ke"></a>2.5

<a name="h.eah0h6d7kp8g"></a>HindIII

<a name="h.jg8mavkhjx4x"></a>2.5

<a name="h.ynes69vwx2a8"></a>2.5

<a name="h.jdiek8iiuxyr"></a>Water

<a name="h.dhz941gr36lt"></a>20

<a name="h.5zp4m3qxafvb"></a>20

<a name="h.6vuwyx78z8vy"></a>

<a name="h.fm8d62yxo0s7"></a>Moraxella DNA isolation

<a name="h.ahp4pul90il1"></a>5 tubes

<a name="h.103xy16pq8sd"></a>i5-67-3

<a name="h.eixf01ul35cp"></a>i5-67-4

<a name="h.1d3n2uqtqbn7"></a>i5-67-5

<a name="h.vjjy8kaqsazr"></a>i5-67-6

<a name="h.nfctmz1jike2"></a>i5-67-7

<a name="h.cgesq5gubx4f"></a>

<a name="h.rpcegok5skbe"></a>Ligation

<a name="h.qr368zzbrb0u"></a>ComC+RBS

<a name="h.anv46tckw2h5"></a>ComA/ComB

<a name="h.ulwtngseffvp"></a>

<a href="#" name="7f3401b442c47506720277dd71996f336c3848ca"></a><a href="#" name="120"></a><tbody></tbody>

<a name="h.3syiguh0lfmj"></a> 

<a name="h.eem2ek9bqsmn"></a>0:01

<a name="h.13tpj4jk0t96"></a>3:01

<a name="h.83xsrnkn337g"></a>0:01

<a name="h.4fixjm3tdq9b"></a>3:01

<a name="h.7mp6cddty1lu"></a>DNA

<a name="h.ojw753lsrst3"></a>0

<a name="h.6aixpvea8naa"></a>10

<a name="h.q4ceo1p08rsp"></a>0

<a name="h.cfq15d285con"></a>7

<a name="h.58i39oislxpa"></a>Buffer

<a name="h.b4as2ysf7b3s"></a>4

<a name="h.4s8ywmxahqxs"></a>4

<a name="h.loip9y2bwpna"></a>3

<a name="h.7a99445io87o"></a>3

<a name="h.95kins8fsk42"></a>AfIII

<a name="h.8nkgv9hgvg2y"></a>2

<a name="h.4qwqihiv6v1c"></a>2

<a name="h.uz6m9qi861xh"></a>2

<a name="h.yzu1y6ulp0m3"></a>2

<a name="h.brkx1vwjgepr"></a>HindIII

<a name="h.eahgvsg83hkd"></a>1

<a name="h.kpgxe55vy8oe"></a>1

<a name="h.n4vbntvljbfx"></a>1

<a name="h.70207gku9opr"></a>1

<a name="h.p2ffzp32haeq"></a>Water

<a name="h.ua7aonz4gvjq"></a>13

<a name="h.5gew9ibfu2os"></a>3

<a name="h.yb4sbsi09v1o"></a>14

<a name="h.wpwhhzk6f6dc"></a>7

<a name="h.1b81wf4y3z2h"></a>Total

<a name="h.wepz54rj0k48"></a>20

<a name="h.s8fv27novtpm"></a>20

<a name="h.pvq7v89frdsc"></a>20

<a name="h.4ekc5znwqg7o"></a>20

<a name="h.lopl3kpy65gs"></a> 

<a name="h.1jfsi66mnhop"></a>1

<a name="h.m2maolbamff5"></a>2

<a name="h.q1qnl064y30g"></a>3

<a name="h.v6hwunk587wv"></a>4

<a name="h.p3xoepe68eh2"></a>

<a name="h.75c6uhffhtyb"></a>Transformation Ligation

<a name="h.bklg36gdsogq"></a>1→ i5-68-1→ 0 colonies

<a name="h.unbx4zcldrvf"></a>2→ i5-68-2→ 0 colonies

<a name="h.gkpr11cd4og"></a>3→ i5-68-3→ Carb 5 colnies

<a name="h.5ioe6k1qs6ot"></a>4→ i5-68-4→ 50 colonies → picked 2 → i5-68-11 & i5-68-12

<a name="h.p8ednnhtjps6"></a>i5-68-4 (+)--> 20 colonies

<a name="h.1xc11ne41q1"></a>

<a name="h.q7s093kn7mwx"></a>Picked from glycerol stock

<a name="h.czb5decjxy6o"></a>i5-56-2 x10

<a name="h.gj3zlaijwdht"></a>

<a name="h.pmsdd0lnvhfd"></a>Miniprep 9/7

<a name="h.cyt1wfic4fny"></a>glycerol stock

<a name="h.jr3fbbgatf25"></a>i5-66-1→ i5-68-5→ 129.0→ pScr-RBS-GFP

<a name="h.zgxj5dpr0ol0"></a>i5-66-2→ i5-68-6→ 64.5→ pFru-RBS-GFP

<a name="h.3naoyd1p3rxy"></a>i5-66-3→ i5-68-7→ 66.3→ CPM

<a name="h.tn6iylxs2zmh"></a>

<a name="h.vn1y4ldx1645"></a>9/8

<a name="h.5mah9pwfz9d4"></a>Digestion

<a name="h.sz7pbe8wy6vi"></a>

<a href="#" name="bfeca5c58c3c74df314d7081eb828d5a3ee63ee6"></a><a href="#" name="121"></a><tbody></tbody>

<a name="h.u4vjvexcnliy"></a> 

<a name="h.bw7g72dy7aiv"></a>i5-56-2

<a name="h.um4idoutt31r"></a>i5-65-12

<a name="h.5wr7nkzpgfe"></a>i5-65-14

<a name="h.4p726b9kuc6s"></a>DNA

<a name="h.iqmn3tojnkp3"></a>30

<a name="h.twp8epg2g5o3"></a>30

<a name="h.sgnut97gpgo0"></a>30

<a name="h.lxy61o1ezsfy"></a>Buffer

<a name="h.fgel62wweg03"></a>5

<a name="h.6o62qefd7rv9"></a>5

<a name="h.qzg6ktbcaqtz"></a>5

<a name="h.r1b3pwfcyb2w"></a>Water

<a name="h.vcchobqsg9rc"></a>13

<a name="h.w6fnlpil73z7"></a>13

<a name="h.egy4fb8o28dp"></a>13

<a name="h.mezj2gdl8i5f"></a>E

<a name="h.8laoc6nicm2t"></a>1

<a name="h.p8sbslxr0a1v"></a>1

<a name="h.5lrdf0i9uno8"></a>1

<a name="h.zola6kbadp2"></a>S

<a name="h.3db9qkea31t6"></a>0

<a name="h.ujmq4tdr1yys"></a>0

<a name="h.es59ijhk24f7"></a>1

<a name="h.kno8i8hf2gwo"></a>X

<a name="h.g72fsmz6n8z6"></a>1

<a name="h.7nie3jr35fcr"></a>1

<a name="h.q5on0ulw4kzs"></a>0

<a name="h.mdpv8fw5wot8"></a>Total

<a name="h.63wq0jre1ca0"></a>50

<a name="h.xrp1ycr2e86k"></a>50

<a name="h.f7heefrcv23n"></a>50

<a name="h.wx85vs5kw8bt"></a> 

<a name="h.cqoj0coi71yo"></a>i5-68-8

<a name="h.krwpz1dfzpo7"></a>i5-68-9

<a name="h.3mobtwd121gf"></a>i5-68-10

<a name="h.z6klikuezt27"></a>

<a name="h.vqwpaw82jf5r"></a>Digestion

<a name="h.9v9hangsh4z6"></a>

<a href="#" name="78c62325e5cd1f5e71aa012a4b748580a14b3efa"></a><a href="#" name="122"></a><tbody></tbody>

<a name="h.iups8ftxu5o8"></a> 

<a name="h.lekgnf21rdcs"></a>i5-68-7

<a name="h.82roslzg44gr"></a>i5-65-19

<a name="h.yf3crpb76jg8"></a>i5-59-2

<a name="h.4910i2h7o158"></a>i5-59-3

<a name="h.kkm28cl2dz0"></a>i5-68-5

<a name="h.njv46jhgg3n9"></a>i5-68-6

<a name="h.pn0vt4cgk7ey"></a>DNA

<a name="h.2dht54e545bh"></a>37.7

<a name="h.lz4hv0jt75h8"></a>41

<a name="h.hu3h5bcc5yhh"></a>15.1

<a name="h.jp7tfqlngd37"></a>19.5

<a name="h.7iq2y4f4q7vp"></a>19.4

<a name="h.irt9rx083l0"></a>38.8

<a name="h.pomjqyi7h9ad"></a>Buffer

<a name="h.v2lp5lg5kwst"></a>5

<a name="h.sxwcbhfahylo"></a>5

<a name="h.q56ed7h4cdx6"></a>5

<a name="h.84jffdhhzg5m"></a>5

<a name="h.ndli36tbouwd"></a>5

<a name="h.diti49w9ctzq"></a>5

<a name="h.74yp1jluwc8i"></a>S

<a name="h.h20c4ekdvbbj"></a>2

<a name="h.5vli26muwiv9"></a>2

<a name="h.j3wx8hquusye"></a>0

<a name="h.blkodokj2qab"></a>0

<a name="h.pdowfs74verw"></a>0

<a name="h.qjkipolsz7h"></a>0

<a name="h.c4nbhovj62yc"></a>P

<a name="h.ynv4bn31hdib"></a>2

<a name="h.q2tzll3oglsh"></a>2

<a name="h.j4gwvfnwjicd"></a>2

<a name="h.lll81yew33hu"></a>2

<a name="h.nilpk54fb0vn"></a>2

<a name="h.hyme8mxfk5au"></a>2

<a name="h.3870kk59tj7q"></a>X

<a name="h.5dblokox74zb"></a>0

<a name="h.6m4q7png7xe1"></a>0

<a name="h.20r3rht54zqv"></a>2

<a name="h.8tmxhvytw1ix"></a>2

<a name="h.vx69utiitwh"></a>2

<a name="h.4t9xgmdky1b"></a>2

<a name="h.el4qncjeh5oj"></a>Water

<a name="h.suh907aaz6tg"></a>3.3

<a name="h.54l4e7kzjy8q"></a>0

<a name="h.espp1sevhiq"></a>25.9

<a name="h.jayou9nkicqg"></a>21.5

<a name="h.scl3o4xgvpuz"></a>21.6

<a name="h.vo7naxfzmkm8"></a>2.2

<a name="h.8w2a029cnzh3"></a>Total

<a name="h.ljfsb83t5469"></a>50

<a name="h.bzwv4fwq6brb"></a>50

<a name="h.kf3866klcav9"></a>50

<a name="h.ara1769ml2zn"></a>50

<a name="h.vw6v3hhi3o72"></a>50

<a name="h.ij9tkrvdh83z"></a>50

<a name="h.u590grv3f8bv"></a> 

<a name="h.va4cshqd3d35"></a>i5-69-1 BB(CPM)

<a name="h.bl4wswujl70y"></a>i5-69-2 BB(TT)

<a name="h.q9m3mexku4rc"></a>i5-69-3 RBS-Fru

<a name="h.gisy50247czw"></a>i5-69-4 RBS-Scr

<a name="h.cwo9gam7jn0q"></a>i5-69-5 pScr-RBS-GFP

<a name="h.ce1l7d3eh6kk"></a>i5-69-6 pFru-RBS-GFP

<a name="h.y76cqusdr5xt"></a>

<a name="h.aomonotu0avk"></a>

<a name="h.mcpc6i5zs0yk"></a>Inoculated from glycerol stock

<a name="h.grw0sjohs6vw"></a>i5-59-2

<a name="h.5r3foi42sp0q"></a>i5-59-3

<a name="h.u7wv4v7unwtx"></a>i Carb

<a name="h.vvs3m23aylsw"></a>

<a name="h.z89mg8ge4g4t"></a>Redid ligation of ComC +RBS

<a name="h.kf6k60ds9iy1"></a>

<a name="h.h5j3p0hmx961"></a>Gel Purification

<a name="h.mtd91in3tyex"></a>i5-69-1→ 15.8

<a name="h.ijgqkauzt4t9"></a>i5-69-2→ 26.9

<a name="h.fn8dyrf93ypt"></a>i5-69-3→ 15.1

<a name="h.375ah44xs065"></a>i5-69-4→ 20.4

<a name="h.2sado4khityu"></a>i5-69-5→ 12.0

<a name="h.fclsvvdcgr26"></a>i5-69-6→ 12.9

<a name="h.pj7n7jyz5fi9"></a>

<a name="h.2wsau5onc1bj"></a>Ligation

<a name="h.5zmw7cd7wonw"></a>

<a href="#" name="199dd218a27992a0ed4347cb3202a94cf9e3af0a"></a><a href="#" name="123"></a><tbody></tbody>

<a name="h.mtko7bfcetcw"></a> 

<a name="h.6iubaxyxnbtk"></a>i5-69-5

<a name="h.nt13uft7655v"></a>i5-69-6

<a name="h.y04zli7xpdqu"></a>i5-69-2

<a name="h.wsbi6d3hbhs7"></a>i5-69-1

<a name="h.5y7g59fkq7jh"></a>i5-69-3

<a name="h.sxdcl3chmgw"></a>i5-69-4

<a name="h.qeipxdf39clw"></a>

<a name="h.65j8hkluqju9"></a>3:01

<a name="h.13exs293e950"></a>3:01

<a name="h.nqhilw52lbdv"></a>0:01

<a name="h.kc445ui25lx4"></a>0:01

<a name="h.lakj7rmaq5vp"></a>3:01

<a name="h.gubmvgorgct0"></a>3:01

<a name="h.6ngaim79cg52"></a>Insert

<a name="h.qulkryl6wr3q"></a>5

<a name="h.a2qsjawg1mkk"></a>5

<a name="h.6ljgjuwpdqlp"></a>5

<a name="h.vv1chhb76yub"></a>5

<a name="h.tjxk1tb6ghrw"></a>5

<a name="h.17v083pomsaz"></a>5

<a name="h.yvipofoq9n42"></a>Vector

<a name="h.r67u3u5jvr7d"></a>2

<a name="h.4gxsjgvmezzr"></a>2

<a name="h.6916u39usu8x"></a>2

<a name="h.f9qkr9hfucqm"></a>3

<a name="h.sci5sh5ces3z"></a>3

<a name="h.h99vn4bclsae"></a>3

<a name="h.6266nbdnjo0x"></a>Buffer

<a name="h.5m8tg4noisep"></a>2

<a name="h.fbb1zf6fa9us"></a>2

<a name="h.15vlyunv6iuc"></a>2

<a name="h.7meb55p5t6u9"></a>2

<a name="h.b384955ley5s"></a>2

<a name="h.o8cjhp3qdzuq"></a>2

<a name="h.zhlg9i6nh0sf"></a>Ligase

<a name="h.7d07n56qpiwx"></a>2

<a name="h.unotvnvy9rz2"></a>2

<a name="h.3drc3lqlhcwn"></a>2

<a name="h.zd91mcn7mql7"></a>2

<a name="h.q3ajf54z00be"></a>2

<a name="h.prc5cw1iynj6"></a>2

<a name="h.q7x5h3ax62db"></a>Water

<a name="h.a14d47exo14k"></a>9

<a name="h.y7lrfo1e10tq"></a>9

<a name="h.vln3rimj4ttd"></a>14

<a name="h.rny8tp77c4w7"></a>13

<a name="h.v7plm2b74pkv"></a>9

<a name="h.kwaucv7ltmx2"></a>10

<a name="h.15taam5y6hdq"></a>Total

<a name="h.ed6x95ucdsvc"></a>20

<a name="h.l6dlc6a30hky"></a>20

<a name="h.87q2nxqc7fql"></a>20

<a name="h.ar30y4rhtu0h"></a>20

<a name="h.3szfh2z78r85"></a>20

<a name="h.bec1jz36nhcz"></a>20

<a name="h.x18l0mltx0u8"></a> 

<a name="h.8rkna7k7kxax"></a>1

<a name="h.lgcfang0fkd6"></a>2

<a name="h.4qakqt2imog1"></a>3

<a name="h.lzdy2s37uif5"></a>4

<a name="h.2ucojtstgvc4"></a>5

<a name="h.wdkz5ve0vokg"></a>6

<a name="h.3avtjahfrnif"></a>

<a name="h.q96qebatfyfa"></a>Transformation

<a name="h.qwgtjdg6mk0h"></a>1→ i5-71-1→ 3:1 (0 colonies) picked 1 → i5-71-14

<a name="h.mto6s87cil9g"></a>2→ i5-71-2→3:1 (7 colonies) picked 1 → i5-71-15

<a name="h.e1u1n0sarqh5"></a>3→ i5-71-3→0:1 (10 colonies)

<a name="h.yop0jxc8xelv"></a>4→ i5-71-4→0:1(0 colonies)

<a name="h.mbhk196dh3bp"></a>5→ i5-71-5→3:1(10 colonies) picked 1→ i5-71-16

<a name="h.sjbc6alzslps"></a>6→ i5-71-6→3:1 (150+ colonies) picked 1→ i5-71-17

<a name="h.hhedlt3m84rg"></a>

<a name="h.u9v8kc8g8d4a"></a>9/9

<a name="h.qveof7rigtla"></a>

<a name="h.etfrsecxgt8w"></a>PCR

<a name="h.nly1exshky89"></a>nspC

<a name="h.fp1rpgjc18bs"></a>

<a href="#" name="97f1e4f4a8d78a07496186a291194fe07ad9f06f"></a><a href="#" name="124"></a><tbody></tbody>

<a name="h.60e79gbfteru"></a> 

<a name="h.pbgcz76pk4cm"></a>1

<a name="h.rgnk48ti62x0"></a>2

<a name="h.j5ss6cq69zcq"></a>3

<a name="h.j0uqmny9gurx"></a>DNA

<a name="h.s5462yh15wo2"></a>1

<a name="h.q3lj5lf3fhoo"></a>1

<a name="h.wkno8916kcy8"></a>1

<a name="h.4utzqsbiqg4b"></a>F

<a name="h.9zirffrppsuy"></a>2.5

<a name="h.2q3z6bt83u9p"></a>2.5

<a name="h.dqopn7aerpc6"></a>2.5

<a name="h.trbd1hzg73r5"></a>R

<a name="h.voojcky6kij5"></a>2.5

<a name="h.fyxi6af2monj"></a>2.5

<a name="h.3kqeolpotukl"></a>2.5

<a name="h.316l2ba09xy1"></a>Q5

<a name="h.7ohlulwf9umq"></a>25

<a name="h.onw5cj24fbqp"></a>25

<a name="h.6quoyidpjvvy"></a>25

<a name="h.d36w46yy2zgu"></a>Water

<a name="h.fcwomchsnpkn"></a>19

<a name="h.7k0mex7esyym"></a>19

<a name="h.f5qek686tim"></a>19

<a name="h.5zkeusntdyeo"></a> 

<a name="h.7jkgjblydggb"></a>1

<a name="h.bbwl5twvsz4k"></a>2

<a name="h.hfawmwfh0zxw"></a>3

<a name="h.oop4l2dlf0zn"></a>

<a name="h.x4uey2olnyra"></a>1→ i5-71-11→ 59.3

<a name="h.hpvp8slprskq"></a>2→ i5-71-12→ 104.3

<a name="h.3tioa6xtcnwm"></a>3→ i5-71-13→ 60.8

<a name="h.vjd7gise4i96"></a>

<a name="h.wvwb5voz6r17"></a>Miniprep

<a name="h.6wshxk5anit7"></a>i5-68-11→ i5-71-7

<a name="h.umptp25gayno"></a>i5-68-12→ i5-71-8

<a name="h.6ucf452c4pvv"></a>

<a name="h.gs4s1fhmrfml"></a>Test Digestion

<a name="h.kvg7p8ry820"></a>

<a href="#" name="8d76f05cc2676a57c891f4370e0711393d3f7595"></a><a href="#" name="125"></a><tbody></tbody>

<a name="h.vbhr0jcretvj"></a> 

<a name="h.9lp4kdygiu8f"></a>i5-71-7

<a name="h.qaif6ifwpstx"></a>i5-71-8

<a name="h.ycbns8ng0sab"></a>DNA

<a name="h.sq448adva9f6"></a>3

<a name="h.lfqvk4b68bu0"></a>6

<a name="h.n1tg1l8zwkp8"></a>Nuffer

<a name="h.99il5bd8yeou"></a>2

<a name="h.wxfu4pdpzwnn"></a>2

<a name="h.fjz4zvgsyp2u"></a>E

<a name="h.addto02pgkei"></a>1

<a name="h.xk3kfzzm5mi"></a>1

<a name="h.jcxnsyvib121"></a>X

<a name="h.54vgpz36qcu4"></a>0

<a name="h.3lrbyon0tmzu"></a>0

<a name="h.lnhgbcr9s1rn"></a>S

<a name="h.a3qxtzmz0e0h"></a>1

<a name="h.907ldno1r7a3"></a>1

<a name="h.oqbq2h4i96f3"></a>Water

<a name="h.n47h6d6td4s2"></a>13

<a name="h.r5ljus99mgn9"></a>10

<a name="h.k8ixtyxvs0bq"></a>Total

<a name="h.kgme3wza0ff7"></a>20

<a name="h.p3aoxeye39cv"></a>20

<a name="h.9xdosc8nbh7w"></a>

<a name="h.89rki7r68kff"></a>Digestion

<a name="h.496ac77afmm6"></a>

<a href="#" name="4aaffd1a9b15b637f5b9a3b200c0fde09af4361a"></a><a href="#" name="126"></a><tbody></tbody>

<a name="h.ro3fddf7u0ic"></a> 

<a name="h.y7sr1gtywd5u"></a>i5-30-8

<a name="h.vhwohyuseo50"></a>i5-71-7

<a name="h.9x4fyu1wt5jn"></a>DNA

<a name="h.squkr6f0gvob"></a>30

<a name="h.mpmdzhgz5rla"></a>30

<a name="h.ull7r2mkwtwj"></a>Nuffer

<a name="h.biwiul5h5td3"></a>5

<a name="h.22g4wiitfhma"></a>5

<a name="h.y3r5954tvpk2"></a>E

<a name="h.jclv2sjryjl5"></a>13

<a name="h.ljdzzr5inhn5"></a>13

<a name="h.fe1vlsv9pymu"></a>X

<a name="h.d2iutdap2l39"></a>1

<a name="h.rkcv4p1vmgu2"></a>1

<a name="h.w1rbok26dxuh"></a>S

<a name="h.adwv47pbq6zi"></a>1

<a name="h.w3gstoqr3x5o"></a>0

<a name="h.8r0g3zhf2nmy"></a>Water

<a name="h.qyg9h08aw1j3"></a>0

<a name="h.k83vf5u0w4cn"></a>1

<a name="h.39t6h9ao9vip"></a>Total

<a name="h.wlpyvl9ojjps"></a>50

<a name="h.trk7ftjunm4g"></a>50

<a name="h.ukwobcecbw7m"></a> 

<a name="h.t8dbu9k8nmei"></a>1

<a name="h.smp0wc2jpun5"></a>2

<a name="h.k2gol3k5zdqv"></a>

<a name="h.5i9gm9z1p89o"></a>9/9

<a name="h.uhkuuifb3egz"></a>Miniprep to glycerol stock

<a name="h.mfbo3cfabyz1"></a>i5-59-3 Carb→ i5-72-1 → 78.9

<a name="h.ks00edeok11z"></a>i5-59-2 Carb → i5-72-2→ 109.7

<a name="h.wr7zoe1l04rf"></a>i5-67-8→ i5-72-3→ 58.9

<a name="h.r2cqsbk3dmul"></a>i5-67-9→ i5-72-4→ 51.2

<a name="h.mgb5urxashs3"></a>i5-67-10→ i5-72-5→ 121.6

<a name="h.1bu4qgrmlu6t"></a>i5-65-21→ i5-72-6→ 86.4

<a name="h.ipg02qqh4ub8"></a>

<a name="h.qemlk9patecq"></a>Digestion(nspC)

<a name="h.rpx3lepsh94f"></a>

<a href="#" name="48ae2d5cd1802400e69b7d1e0edf0b136e3e3b61"></a><a href="#" name="127"></a><tbody></tbody>

<a name="h.nbhyn899y8ye"></a> 

<a name="h.kzyqslglppyh"></a>i5-71-11

<a name="h.q9moz3myhq5i"></a>i5-71-12

<a name="h.1yy8ufsqp0r2"></a>i5-71-13

<a name="h.fy7cdfe3meh7"></a>DNA

<a name="h.ov80ecvqnw7b"></a>33

<a name="h.7ppzw7dle3v8"></a>20

<a name="h.44z3uo8l69x8"></a>33

<a name="h.lieu9zx3jy6m"></a>Buffer

<a name="h.d2yv95olo3i4"></a>5

<a name="h.ky44f3e11glx"></a>5

<a name="h.npqqs1y435g7"></a>5

<a name="h.77aof2swkseu"></a>X

<a name="h.xp7t7n235pnv"></a>1

<a name="h.cv05dw56ar4o"></a>1

<a name="h.r7pxd1hh3cg0"></a>1

<a name="h.xlwe3tjafbpx"></a>P

<a name="h.vomq092ecflx"></a>1

<a name="h.3c1n66b8qlrr"></a>1

<a name="h.3ejpe9pau9mr"></a>1

<a name="h.93n0ilbauekr"></a>Water

<a name="h.u6gmvjq4x5vo"></a>10

<a name="h.qodwmvmco1ov"></a>23

<a name="h.4fxjjqi8rc93"></a>23

<a name="h.fi3uny8a4im"></a>Total

<a name="h.lwgelbve9hi"></a>50

<a name="h.n5qu5s24enek"></a>50

<a name="h.nsfv8yall9kd"></a>50

<a name="h.r11opaapsceu"></a> 

<a name="h.uh3kddyion0i"></a>1

<a name="h.ghvw4b4mxmx5"></a>2

<a name="h.mcja0oqfgfal"></a>3

<a name="h.juyw8sltz4be"></a>

<a name="h.lk181y6iausr"></a>1→ i5-71-11

<a name="h.whpbfv53ufz8"></a>2→ i5-71-12

<a name="h.dn5y0l8xw7d1"></a>3→ i5-71-13

<a name="h.ou1j0e59q40n"></a>

<a name="h.w6raxlb0xwet"></a>Digestion

<a name="h.rp12cyq99k7q"></a>

<a href="#" name="5a9707e5a980682e7c322524ca0e4d113c881039"></a><a href="#" name="128"></a><tbody></tbody>

<a name="h.blzxjk87j57b"></a> 

<a name="h.414r6zdcl04h"></a>i5-56-2

<a name="h.tvsynoo1u2ck"></a>i5-71-12

<a name="h.d2wfnk2kipbe"></a>i5-71-13

<a name="h.ibftjw6h84xo"></a>DNA

<a name="h.stw7dxcsx3tv"></a>33

<a name="h.u9ix76tej571"></a>20

<a name="h.d08t5a5qv2vh"></a>33

<a name="h.5lwvuz4el3pd"></a>Buffer

<a name="h.mwpxo19o7cx8"></a>5

<a name="h.pg3q2k79nxqx"></a>5

<a name="h.hy5dbpfe0nxt"></a>5

<a name="h.kaoktqa0us81"></a>X

<a name="h.zae05g4t6u1e"></a>1

<a name="h.9wiv83otry37"></a>1

<a name="h.jrlr38uam0lb"></a>1

<a name="h.o94vh7k6xw9z"></a>P

<a name="h.1llkywvl4t8i"></a>1

<a name="h.mad498np7g2t"></a>1

<a name="h.ca6qhdbqhiwa"></a>1

<a name="h.iq850nb07upl"></a>Water

<a name="h.frrojtfc6dde"></a>10

<a name="h.vo62io4izgnm"></a>23

<a name="h.c2fx1xaefhho"></a>23

<a name="h.7v7vjd2e4t5t"></a>Total

<a name="h.iijw6lsiz5nn"></a>50

<a name="h.69o7nq5jtwwj"></a>50

<a name="h.mg31o3ha3a9f"></a>50

<a name="h.jnuzmwk99bcy"></a> 

<a name="h.jto8deccdpct"></a>1

<a name="h.eezd7xojngjd"></a>2

<a name="h.eo0smsvu48lg"></a>3

<a name="h.omn9cr96ue6b"></a>

<a name="h.zgj6hk1s8tt3"></a>Digestion

<a name="h.ypziqbpze7l8"></a>

<a href="#" name="4ad56f7f91536346fa6b52c7705d9fe18d526243"></a><a href="#" name="129"></a><tbody></tbody>

<a name="h.p2e1pqqlji5z"></a> 

<a name="h.ivlg0z5nxx7m"></a>i5-56-2

<a name="h.kwx33i4zh1v9"></a>i5-56-2

<a name="h.cksqcp8gsg9g"></a>DNA

<a name="h.32sv3ofklb9o"></a>20

<a name="h.y64ou07pxe2b"></a>34

<a name="h.86u2cgv3oj1a"></a>Buffer

<a name="h.7h2oyy877pfi"></a>5

<a name="h.c18tmrbsgmyc"></a>5

<a name="h.4zqi4sb8rmnw"></a>S

<a name="h.pwmuk3nex4o7"></a>1

<a name="h.11cw5k6p1865"></a>1

<a name="h.2sqqmljb39s7"></a>P

<a name="h.obemla78wnrw"></a>1

<a name="h.zbfjuniu9ioe"></a>1

<a name="h.sp1jbsz4pht7"></a>Water

<a name="h.7s7kfkw7p8fx"></a>23

<a name="h.enq77ehmh48a"></a>9

<a name="h.mp4lnsv0xsqi"></a>Total

<a name="h.vamppeiauzkb"></a>50

<a name="h.wzkkg1yxtfmz"></a>50

<a name="h.7vsuqxqfkmb1"></a> 

<a name="h.8bysgk8naggr"></a>4

<a name="h.hhquhhk17vvd"></a>5

<a name="h.kinkj0vrsjb7"></a>

<a name="h.afavmxws9w0z"></a>Gel Extraction

<a name="h.pjbpbpu2c"></a>i5-71-12→ nspC→ i5-73-1→ 14.4

<a name="h.kulpmhe8xj14"></a>i5-71-13→ nspC→ i5-73-2→ 7.1

<a name="h.6vk8ng3fxwk9"></a>RBS-ComB→ i5-73-3→ 7.9

<a name="h.9vuwipvqqb7w"></a>

<a name="h.hbgrl0f8qjk5"></a>Picking colonies

<a name="h.8gnhqgwe4ad2"></a>i5-69-7→ 3:1→ 50+ colonies→ picked 3: i5-73-4, i5-73-5, i5-73-6

<a name="h.9ct7qakmwnrh"></a>i5-59-8→ 0:1→ 0 colonies

<a name="h.t4345ey5tx64"></a>

<a name="h.fmzfem4b8mcj"></a>Transformation (carb plates)

<a name="h.mh6s5s9oa2q2"></a>1→ i5-74-1 (3:1 RBS-ComB)

<a name="h.hw3l4aea61u3"></a>2→ i5-74-2 (0:1)

<a name="h.dnno48femox"></a>1--: i5-74-3 (3:1 RBS-nspC)--> 30 colonies → picked 2→ i5-74-14 & i5-74-15

<a name="h.hh2tr4usp4xb"></a>2→ i5-74-4(0:1)

<a name="h.rcddwavgsa7g"></a>3→ i5-74-5 (3:1 RBS-nspC)--> 20 colonies→ picked 2→ i5-74-16, i5-74-17

<a name="h.wdjmsuy2n2gc"></a>4→ i5-74-6 (0:1)

<a name="h.kn57q3vv5szi"></a>i5-56-2→ + control (RBS)

<a name="h.th3g862jc2q2"></a>

<a name="h.wke3unnt3mqp"></a>9/10

<a name="h.kjilu2bnjnu9"></a>Miniprep to glycerol stock

<a name="h.tiylzfw7yyl2"></a>

<a name="h.sk97tdo7f8m3"></a>i5-73-4→ i5-74-7→ 62.1[RBS-ComC Carb]

<a name="h.dlddnkgxi068"></a>i5-73-5→ i5-74-8→ 69.3[RBS-ComC Carb]

<a name="h.1nmvot4thgo9"></a>i5-73-6→ i5-74-9→ 83.5[RBS-ComC Carb]

<a name="h.wmizz1nu4jga"></a>

<a name="h.57j5v2whl5dq"></a>i5-71-14→ i5-74-10→ 92.0[TT-pScr-RBS-GFP]

<a name="h.uib5hadjn1pd"></a>i5-71-15→ i5-74-11→ 190.3[TT-Fru-RBS-GFP]

<a name="h.i74aaahb2o9t"></a>i5-71-16→ i5-74-12→ 58.8[CPM-RBS-fruR]

<a name="h.r2jkh1qbh3lv"></a>i5-71-17→ i5-74-13→ 133.7[CPM-RBS-ScrR]

<a name="h.osm75cci639t"></a>

<a name="h.s8o5jkefx96m"></a>Digestion

<a name="h.kn8v5a3t59td"></a>

<a href="#" name="5fed1902a5413e429b73fa38783a3bb267efd76f"></a><a href="#" name="130"></a><tbody></tbody>

<a name="h.kjphhv39kh2f"></a> 

<a name="h.v6ebdd4oyd2m"></a>i5-74-9 (RBS-ComC)

<a name="h.r7avmeo9ljg6"></a>i5-56-2 (RBS)

<a name="h.5mv8gkyqews4"></a>DNA

<a name="h.irj89rgqiuyp"></a>24

<a name="h.fptko52dr1j"></a>13

<a name="h.onwgm49cupv1"></a>Buffer

<a name="h.sk4m22oafbpg"></a>5

<a name="h.otqrx7ncixk4"></a>5

<a name="h.qwefmcoh1rzc"></a>E

<a name="h.sry5py87ug5u"></a>1

<a name="h.norkl3kaul8o"></a>1

<a name="h.ugk7mxvr8cmh"></a>X

<a name="h.hiup42njhd93"></a>0

<a name="h.xkviu9dzcqfm"></a>1

<a name="h.r30zfcheyt9j"></a>S

<a name="h.akc6n1pzotcr"></a>1

<a name="h.mn534t35rjn2"></a>0

<a name="h.xlkt2no64i4u"></a>Water

<a name="h.d1fggxq57nv9"></a>19

<a name="h.g3n6seydp4gs"></a>30

<a name="h.6odlm6sf5dae"></a>Total

<a name="h.86m51pbnoa6d"></a>50

<a name="h.y7kf3ehu0slu"></a>50

<a name="h.axemmzkddpb3"></a> 

<a name="h.g86kdr6bh7g9"></a>i5-74-14

<a name="h.lduosx7xhmgn"></a>i5-74-15

<a name="h.tanp54qckyj6"></a>

<a name="h.14f9ckuothh"></a>Digestion

<a name="h.3nrvlra1wjn"></a>

<a href="#" name="e98503e266801b846cfb4339498dc95ffc22a724"></a><a href="#" name="131"></a><tbody></tbody>

<a name="h.g8fs796av7qg"></a> 

<a name="h.tz2h0xdp8kj9"></a>i5-74-10

<a name="h.2fudk28taz4o"></a>i5-74-11

<a name="h.7ty4m1p3vad"></a>i5-74-13

<a name="h.al83cbqx7vps"></a>i5-74-12

<a name="h.n6lm2vxoabvm"></a>DNA

<a name="h.8qb5mlmm28cu"></a>22

<a name="h.231dregk7139"></a>11

<a name="h.8s2xich6kdv3"></a>15

<a name="h.rbir6pywitnt"></a>35

<a name="h.iupv1crhmb66"></a>Buffer

<a name="h.ltv8inxq0oo2"></a>5

<a name="h.tmazlc9nc8gy"></a>5

<a name="h.uwwbrmigfde8"></a>5

<a name="h.7u3bpgwm6hhx"></a>5

<a name="h.f61lvfxy9m3l"></a>Water

<a name="h.v1t2uzhc1rmc"></a>19

<a name="h.9wfbevbuoa54"></a>30

<a name="h.t7xjpbu399xk"></a>26

<a name="h.b5pcnokeeeqk"></a>6

<a name="h.dykwchpdb19i"></a>P

<a name="h.fhy4t9i3jjgp"></a>2

<a name="h.ok0yah620v4d"></a>2

<a name="h.8hmx0fsq89cy"></a>2

<a name="h.jrhtmbufn7ld"></a>2

<a name="h.t7pssfwtf2e3"></a>X

<a name="h.8oiadteturr6"></a>2

<a name="h.u2frawkk7cy3"></a>2

<a name="h.k7hyvo8kx42n"></a>0

<a name="h.kqnt2pm7xs7t"></a>0

<a name="h.c6afcnkkrjsn"></a>S

<a name="h.k4tr2pgd8wip"></a>0

<a name="h.qex0euwduk5p"></a>0

<a name="h.e3lguhtavmcd"></a>2

<a name="h.nn0zlnxag006"></a>2

<a name="h.f8lf7o6fsjd9"></a>Total

<a name="h.76inye2imex6"></a>50

<a name="h.bsgm47yubneu"></a>50

<a name="h.5qlli9v1sjip"></a>50

<a name="h.ytq1gars1nvb"></a>50

<a name="h.wcgeeud8xmk3"></a> 

<a name="h.q8gunw8h98ni"></a>1

<a name="h.wb6i73qywqct"></a>2

<a name="h.xyqcb99ra9ij"></a>3

<a name="h.e447saxdond"></a>4

<a name="h.f0f5yje81z19"></a>

<a name="h.yhpygzqwzsde"></a>1→ i5-75-1

<a name="h.l13fkya3mj9f"></a>2→ i5-75-2

<a name="h.mfx453wro9sf"></a>3→ i5-75-3

<a name="h.29fo2ixtbfsb"></a>4→ i5-75-4

<a name="h.pti43q1gqnyj"></a>

<a name="h.rh3n95r4ep48"></a>Inoculate from stock

<a name="h.m4z7cjlwwfmv"></a>i5-71-14

<a name="h.515njvnia71g"></a>i5-71-15

<a name="h.35i6osee2gpb"></a>i5-71-16

<a name="h.ka7voenbkcpg"></a>i5-71-17

<a name="h.7kj537uynp0n"></a>i5-56-1 (3) [BBcarb-RBS]

<a name="h.ehmh3klyqhgc"></a>

<a name="h.jwbmj41poiff"></a>Gel Purification

<a name="h.vn2lnhii69fg"></a>i5-74-14→ 7.8

<a name="h.ynjpmd550391"></a>i5-74-15→ 17.9

<a name="h.90ijqz2l3ceg"></a>

<a name="h.hamfy564w98j"></a>Ligation

<a name="h.3p2w1fv45xne"></a>Vector: i5-74-15

<a name="h.q6r85adt4bte"></a>Insert: i5-74-14

<a name="h.9w03mqqqe00y"></a>

<a href="#" name="94e013a6631295591f8e060a159ae59bf68da693"></a><a href="#" name="132"></a><tbody></tbody>

<a name="h.as42ddt54gu0"></a> 

<a name="h.ixy1gxg5ct5q"></a>3:01

<a name="h.7524egi97dkf"></a>0:01

<a name="h.mc25sjsnb0ql"></a>Insert

<a name="h.c0eja11ffcvf"></a>3

<a name="h.mvo67ntq2ib6"></a>0

<a name="h.j1g9sh7annpi"></a>Vector

<a name="h.pys2ylxyvtn"></a>5

<a name="h.4qarovcy01xy"></a>5

<a name="h.8pc8dffvdfuh"></a>Buffer

<a name="h.f9kcgxfbziv2"></a>2

<a name="h.wsyde2ookfm9"></a>2

<a name="h.m5dtcmsaz1az"></a>Ligase

<a name="h.fyh3tqlfnsc9"></a>7

<a name="h.d2kiij7ycclq"></a>1

<a name="h.f4t54e4ei371"></a>Water

<a name="h.lk5d0zqi1wxk"></a>9

<a name="h.e6656d2dhwox"></a>12

<a name="h.9h4h99umquci"></a>Total

<a name="h.1qb626rmssqd"></a>20

<a name="h.pfx0kie800v8"></a>20

<a name="h.3s5e59lnskng"></a>Total

<a name="h.n3ekdpq8dq5g"></a>A

<a name="h.u7gku2f10j1x"></a>B

<a name="h.j9awiykyd9gw"></a>

<a name="h.i3xeenjph0nw"></a>Insert: i5-55-8

<a name="h.gcrzw9npvo3f"></a>Vector: i5-73-3

<a name="h.y72qwpp7h7eu"></a>

<a href="#" name="65c7a2694db1c8832da70b92abbd52624f43d3a0"></a><a href="#" name="133"></a><tbody></tbody>

<a name="h.tmcysie7oav5"></a> 

<a name="h.q7r852vt1az4"></a>3:01

<a name="h.i71bbgvkxak3"></a>0:01

<a name="h.m4nwjj99ovks"></a>Insert

<a name="h.pwe0xdpdw206"></a>7

<a name="h.tb34mfmxacx7"></a>0

<a name="h.6l06fekej5t2"></a>Vector

<a name="h.3oio8dh74rlv"></a>4

<a name="h.7ac7405req0r"></a>4

<a name="h.bssjh6z1mw0x"></a>Buffer

<a name="h.svqx6z6pokpo"></a>2

<a name="h.e9etsqq1zp51"></a>2

<a name="h.lun9tjk2fp20"></a>Ligase

<a name="h.cxl7zl4umjj0"></a>1

<a name="h.2j7jmpgdnclr"></a>1

<a name="h.dj8qqvi5giks"></a>Water

<a name="h.lfllv5ij4yt9"></a>6

<a name="h.bynt16y7q9r4"></a>13

<a name="h.zaxvo5b7afru"></a>Total

<a name="h.xy3cq3mksqaj"></a>20

<a name="h.otpev6j8p9yh"></a>20

<a name="h.v3y8nxwz2hsp"></a>

<a name="h.xux20f2w1w4"></a>Plated

<a name="h.en32v9332svf"></a>A→ i5-75-5→ 100 colonies → picked 2: i5-75-9, i5-75-10

<a name="h.lpuyg1npriry"></a>B→ i5-75-6

<a name="h.o4oi4ibiphum"></a>C→ i5-75-7

<a name="h.9ob855c0wpgo"></a>D→ i5-75-8

<a name="h.ycixdda69gkr"></a>

<a name="h.dvwzpdv1eno2"></a>Appears that ligation from 9/8 failed-- restart from ligation

<a name="h.yxlr9mezed7n"></a>

<a name="h.ezlbzmz9miy8"></a>9/11

<a name="h.7cs4nqhfzktt"></a>Miniprep/Glycerol Stock

<a name="h.gd0ep4egvcft"></a>i5-74-14→ 125.9

<a name="h.osnsf0wl4su4"></a>i5-74-15→ 83.5

<a name="h.18i2jbpa0t44"></a>i5-74-16→ 56.2

<a name="h.e73zwc7yal9y"></a>i5-74-17→ 102.6

<a name="h.d239g79hd1km"></a>

<a name="h.x7s2prv6auuy"></a>Test Digestion

<a name="h.wiapc43lcxx3"></a>

<a href="#" name="bd6b125601041fac7b6df8bd2809d7be2a5ccca3"></a><a href="#" name="134"></a><tbody></tbody>

<a name="h.p89av832cit3"></a> 

<a name="h.rqb1io9ra632"></a>i5-74-14

<a name="h.jeoef13v71m4"></a>i5-74-17

<a name="h.kwazm2ys927p"></a>DNA

<a name="h.ewyp156o8aaa"></a>2

<a name="h.j34kus4q58tl"></a>3

<a name="h.q8dgtl6j8s7d"></a>Buffer

<a name="h.z6e1yyl712hp"></a>2

<a name="h.a9iatx9jywmz"></a>2

<a name="h.cm59imo0yt3m"></a>X

<a name="h.kuru7o1kkb4y"></a>1

<a name="h.7mb9my3c9eir"></a>1

<a name="h.wsxvsfvlpfgh"></a>P

<a name="h.ih346465riai"></a>1

<a name="h.7t1g3ldemx7j"></a>1

<a name="h.hmdcfblp7pna"></a>Water

<a name="h.prifabafyvfw"></a>14

<a name="h.4yhqby22ini9"></a>13

<a name="h.eams5hcggca3"></a>Total

<a name="h.u7gd3qhqrb73"></a>20

<a name="h.k33o12z4po6i"></a>20

<a name="h.zex2bllfode5"></a>

<a name="h.fmrpzrajhrv1"></a>Digestion

<a name="h.ys1mjnwkknmq"></a>

<a href="#" name="ba9bcc40b801f9ef53f4fa0d93fe5d3c804ce8f5"></a><a href="#" name="135"></a><tbody></tbody>

<a name="h.wzszt6itmavs"></a> 

<a name="h.i6l9hl151yqj"></a>i5-74-14

<a name="h.gaztqvpdm575"></a>i5-74-17

<a name="h.apvb5d4ftnvf"></a>DNA

<a name="h.6f8grusbpdeo"></a>24

<a name="h.6dtju5mc6txv"></a>30

<a name="h.7os5grqk9uuv"></a>Buffer

<a name="h.rgbdmpa3t00u"></a>5

<a name="h.h402xgauikn4"></a>5

<a name="h.awuoz4b3d8jt"></a>X

<a name="h.oh1e0x17e3r8"></a>1

<a name="h.6wzjey152afb"></a>1

<a name="h.jgdbrl8mws2i"></a>P

<a name="h.5fvorufh474m"></a>1

<a name="h.o17yjge6tbjo"></a>1

<a name="h.shv0ydscu5ui"></a>Water

<a name="h.vskn4qgkzyjp"></a>19

<a name="h.1ev5hsh5v2rn"></a>13

<a name="h.d4imr56y8sau"></a>Total

<a name="h.ert1cgdaswx"></a>50

<a name="h.jt0vj861ywix"></a>50

<a name="h.5qmte9agqyh7"></a> 

<a name="h.kmd0k561qt"></a>1

<a name="h.nrhojiwhybzf"></a>2

<a name="h.k1jrqjezfx74"></a>

<a name="h.il88opkz832y"></a>Gel Extraction

<a name="h.44w7vg9ej22n"></a>1→ -5-77-1→ 8.3

<a name="h.x9w18awj56m2"></a>

<a name="h.qovgjtcnkjxb"></a>Ligation CPM-RBS-nspC & CPM-RBS-nspC

<a name="h.ig4gifvbdqh"></a>

<a href="#" name="52fb24006be331bfb90352e91106332805569e46"></a><a href="#" name="136"></a><tbody></tbody>

<a name="h.c0l1uut7me93"></a> 

<a name="h.dnkwu8dplbpg"></a>3:01

<a name="h.sqxeiy8dprnc"></a>0:01

<a name="h.s7h9kkjuvz5u"></a>Buffer

<a name="h.3vdp8ccqgycs"></a>2

<a name="h.kqfhqzgz7l7u"></a>2

<a name="h.v7kvsupanqr9"></a>Ligase

<a name="h.46591rpcg9u9"></a>1

<a name="h.wm1uhw5x14ie"></a>1

<a name="h.6rekng48o468"></a>Insert

<a name="h.i0x7i9ufi4a5"></a>8

<a name="h.ngzommxx7t8m"></a>0

<a name="h.12jp2v6y94e9"></a>Vector

<a name="h.2uh36m7gxjix"></a>2

<a name="h.ndfezlaey7p7"></a>2

<a name="h.ur7p06dg80us"></a>Water

<a name="h.c6pmgs5kity"></a>7

<a name="h.hsyh23lj6lxl"></a>15

<a name="h.zcn4x7673c3l"></a>Total

<a name="h.tf6uj7ka1rcp"></a>20

<a name="h.ink2ojktg5dv"></a>20

<a name="h.qwzc0k5u4pwi"></a> 

<a name="h.da0rbm108isk"></a>1

<a name="h.lsjp7o38v8bq"></a>2

<a name="h.vtkkrz5cgtvu"></a>

<a name="h.gbitgkvfweao"></a>Miniprep/Nanodrop

<a name="h.w2fiqnkx62pf"></a>i5-71-14→ 82.4

<a name="h.ymqn5xm1doaf"></a>i5-71-15→ 60.4

<a name="h.c6vpml8l0ud6"></a>i5-71-16→ 66.1

<a name="h.yp50hw66pv9g"></a>i5-71-17→ 99.6

<a name="h.quhmpf893j83"></a>i5-56-2→ 65.0

<a name="h.eb0u3isrq496"></a>i5-56-2→ 5.9

<a name="h.h6rzdmyuei4x"></a>i5-56-2→ 63.4

<a name="h.f86acqh5zykf"></a>

<a name="h.vi6333ijybol"></a>Transformation

<a name="h.m1y20gvsqywq"></a>1→ i5-77-2

<a name="h.xbywy0gvb7tv"></a>2→ i5-77-3

<a name="h.lzqbesix0lhm"></a>

<a name="h.rp7tcg86nq4g"></a>Picked from glycerol

<a name="h.8kic58fd3zyt"></a>i5-25-7 x2

<a name="h.vhwh6uxgzkyu"></a>

<a name="h.wyr6dk8gvynr"></a>9/12

<a name="h.a5flt4130taf"></a>Miniprep

<a name="h.dhdfnsm152fz"></a>i5-25-7

<a name="h.ofymk6tjxh5u"></a>i5-25-7

<a name="h.lek9jelxjggs"></a>

<a name="h.22wen61uswuv"></a>Redo Digestion from 9/10

<a name="h.3nrvlra1wjn"></a>

<a href="#" name="5bf270fbc13a121312893b86e5c8c83c9d68aeb9"></a><a href="#" name="137"></a><tbody></tbody>

<a name="h.g8fs796av7qg"></a> 

<a name="h.tz2h0xdp8kj9"></a>i5-74-10

<a name="h.2fudk28taz4o"></a>i5-74-11

<a name="h.7ty4m1p3vad"></a>i5-74-13

<a name="h.al83cbqx7vps"></a>i5-74-12

<a name="h.n6lm2vxoabvm"></a>DNA

<a name="h.8qb5mlmm28cu"></a>22

<a name="h.231dregk7139"></a>11

<a name="h.8s2xich6kdv3"></a>15

<a name="h.rbir6pywitnt"></a>35

<a name="h.iupv1crhmb66"></a>Buffer

<a name="h.ltv8inxq0oo2"></a>5

<a name="h.tmazlc9nc8gy"></a>5

<a name="h.uwwbrmigfde8"></a>5

<a name="h.7u3bpgwm6hhx"></a>5

<a name="h.f61lvfxy9m3l"></a>Water

<a name="h.v1t2uzhc1rmc"></a>19

<a name="h.9wfbevbuoa54"></a>30

<a name="h.t7xjpbu399xk"></a>26

<a name="h.b5pcnokeeeqk"></a>6

<a name="h.dykwchpdb19i"></a>P

<a name="h.fhy4t9i3jjgp"></a>2

<a name="h.ok0yah620v4d"></a>2

<a name="h.8hmx0fsq89cy"></a>2

<a name="h.jrhtmbufn7ld"></a>2

<a name="h.t7pssfwtf2e3"></a>X

<a name="h.8oiadteturr6"></a>2

<a name="h.u2frawkk7cy3"></a>2

<a name="h.k7hyvo8kx42n"></a>0

<a name="h.kqnt2pm7xs7t"></a>0

<a name="h.c6afcnkkrjsn"></a>S

<a name="h.k4tr2pgd8wip"></a>0

<a name="h.qex0euwduk5p"></a>0

<a name="h.e3lguhtavmcd"></a>2

<a name="h.nn0zlnxag006"></a>2

<a name="h.f8lf7o6fsjd9"></a>Total

<a name="h.76inye2imex6"></a>50

<a name="h.bsgm47yubneu"></a>50

<a name="h.5qlli9v1sjip"></a>50

<a name="h.ytq1gars1nvb"></a>50

<a name="h.wcgeeud8xmk3"></a> 

<a name="h.q8gunw8h98ni"></a>A

<a name="h.wb6i73qywqct"></a>B

<a name="h.xyqcb99ra9ij"></a>C

<a name="h.e447saxdond"></a>D

<a name="h.6xie7r9m479"></a>

<a name="h.ejvht5io04ru"></a>Redo Ligation from 9/8

<a name="h.5zmw7cd7wonw"></a>

<a href="#" name="199dd218a27992a0ed4347cb3202a94cf9e3af0a"></a><a href="#" name="138"></a><tbody></tbody>

<a name="h.mtko7bfcetcw"></a> 

<a name="h.6iubaxyxnbtk"></a>i5-69-5

<a name="h.nt13uft7655v"></a>i5-69-6

<a name="h.y04zli7xpdqu"></a>i5-69-2

<a name="h.wsbi6d3hbhs7"></a>i5-69-1

<a name="h.5y7g59fkq7jh"></a>i5-69-3

<a name="h.sxdcl3chmgw"></a>i5-69-4

<a name="h.qeipxdf39clw"></a>

<a name="h.65j8hkluqju9"></a>3:01

<a name="h.13exs293e950"></a>3:01

<a name="h.nqhilw52lbdv"></a>0:01

<a name="h.kc445ui25lx4"></a>0:01

<a name="h.lakj7rmaq5vp"></a>3:01

<a name="h.gubmvgorgct0"></a>3:01

<a name="h.6ngaim79cg52"></a>Insert

<a name="h.qulkryl6wr3q"></a>5

<a name="h.a2qsjawg1mkk"></a>5

<a name="h.6ljgjuwpdqlp"></a>5

<a name="h.vv1chhb76yub"></a>5

<a name="h.tjxk1tb6ghrw"></a>5

<a name="h.17v083pomsaz"></a>5

<a name="h.yvipofoq9n42"></a>Vector

<a name="h.r67u3u5jvr7d"></a>2

<a name="h.4gxsjgvmezzr"></a>2

<a name="h.6916u39usu8x"></a>2

<a name="h.f9qkr9hfucqm"></a>3

<a name="h.sci5sh5ces3z"></a>3

<a name="h.h99vn4bclsae"></a>3

<a name="h.6266nbdnjo0x"></a>Buffer

<a name="h.5m8tg4noisep"></a>2

<a name="h.fbb1zf6fa9us"></a>2

<a name="h.15vlyunv6iuc"></a>2

<a name="h.7meb55p5t6u9"></a>2

<a name="h.b384955ley5s"></a>2

<a name="h.o8cjhp3qdzuq"></a>2

<a name="h.zhlg9i6nh0sf"></a>Ligase

<a name="h.7d07n56qpiwx"></a>2

<a name="h.unotvnvy9rz2"></a>2

<a name="h.3drc3lqlhcwn"></a>2

<a name="h.zd91mcn7mql7"></a>2

<a name="h.q3ajf54z00be"></a>2

<a name="h.prc5cw1iynj6"></a>2

<a name="h.q7x5h3ax62db"></a>Water

<a name="h.a14d47exo14k"></a>9

<a name="h.y7lrfo1e10tq"></a>9

<a name="h.vln3rimj4ttd"></a>14

<a name="h.rny8tp77c4w7"></a>13

<a name="h.v7plm2b74pkv"></a>9

<a name="h.kwaucv7ltmx2"></a>10

<a name="h.15taam5y6hdq"></a>Total

<a name="h.ed6x95ucdsvc"></a>20

<a name="h.l6dlc6a30hky"></a>20

<a name="h.87q2nxqc7fql"></a>20

<a name="h.ar30y4rhtu0h"></a>20

<a name="h.3szfh2z78r85"></a>20

<a name="h.bec1jz36nhcz"></a>20

<a name="h.x18l0mltx0u8"></a> 

<a name="h.8rkna7k7kxax"></a>1

<a name="h.lgcfang0fkd6"></a>2

<a name="h.4qakqt2imog1"></a>3

<a name="h.lzdy2s37uif5"></a>4

<a name="h.2ucojtstgvc4"></a>5

<a name="h.wdkz5ve0vokg"></a>6

<a name="h.120vbwig79re"></a>

<a name="h.csbhymc5bjx4"></a>Transformation

<a name="h.hhcb8vmai66f"></a>1→ i5-78-1→ [BB-TT-pscR-RBS-GFP]

<a name="h.akyc6axg4o9i"></a>2→ i5-78-2→ [3:1 BB-TT-pFru-RBS-GFP]

<a name="h.q2cd33zbdagm"></a>3→ i5-78-3 (0:1)

<a name="h.6qz23ilf7e6n"></a>4→ i5-78-4 (0:1)

<a name="h.rw4llmwwkkr8"></a>5→ i5-78-5(3:1 BB-CPM-RBS-FruR)

<a name="h.z4c42i75xg07"></a>6→ i5-78-6 (3:1 BB-CPM-RBS-sucR)

<a name="h.1nr8fr1r2gv0"></a>+ control → i5-78-7

<a name="h.oomw5tmm7e0u"></a>

<a name="h.5k8i39ewo62i"></a>Gel Extraction

<a name="h.irc9r8qpe1b4"></a>i5-79-1→ 9.3

<a name="h.7h9j4lsif6oj"></a>i5-79-2→ 30

<a name="h.v1ewvjx4z5ec"></a>

<a name="h.odvz23g90zu6"></a>Ligation

<a name="h.ieid5ury31il"></a>

<a href="#" name="8a6a97f130a82c0e5998c24b6694963d4690f996"></a><a href="#" name="139"></a><tbody></tbody>

<a name="h.i2rsucs5qaue"></a> 

<a name="h.mu8j3nhqkj2g"></a>3:01

<a name="h.ctkfhwms35pt"></a>0:01

<a name="h.gejx7bj25t1i"></a>Insert

<a name="h.w3ybn1mgmdlz"></a>5.6

<a name="h.vthdd39ww20i"></a>0

<a name="h.qijydhd4j42"></a>Vector

<a name="h.7ovr0xp3a8k"></a>1.7

<a name="h.j8omh6aw0gm3"></a>1.7

<a name="h.sv3p3lvmnr58"></a>Buffer

<a name="h.oz1x571x0k85"></a>2

<a name="h.pcnjqgfa1dom"></a>2

<a name="h.yo17yt6r2bqe"></a>Ligase

<a name="h.p2x5lzrwj3y3"></a>2

<a name="h.5kyb0t87mjny"></a>2

<a name="h.i9oijlf73jmf"></a>Water

<a name="h.81ip7dylpmb4"></a>8.7

<a name="h.12c9wbxcw1ot"></a>14.3

<a name="h.1cc2zr2mpq5o"></a>Total

<a name="h.66sz3dboghlu"></a>20

<a name="h.hol8hv8gai3o"></a>20

<a name="h.eko2n7mwluhi"></a> 

<a name="h.ugctm0v742xn"></a>1

<a name="h.n5oworhp7r1h"></a>2

<a name="h.bz84vg606qml"></a>

<a name="h.8mi4ygn4kew7"></a>Transformation

<a name="h.r8r321emb5wf"></a>1→ i5-79-1 (3:1 BB-CPMRBS-FruR-TT-pFru-RBS-GFP) → 100 colonies  → picked two, i5-79-3, i5-79-4

<a name="h.ar9w2rw3ryi8"></a>2 → i5-79-2 (0:1) → 20 colonies

<a name="h.f0yemhlwfbmd"></a>i5-58-10 → + control

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