Team:Evry/Protocoles/04
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<h2> Antibiotiques </h2> | <h2> Antibiotiques </h2> | ||
<b>Carbénicilline:</b> Mettre 150 mg de Carbénicilline dans 15 mL d'eau distillée (10 mg par mL).<br> | <b>Carbénicilline:</b> Mettre 150 mg de Carbénicilline dans 15 mL d'eau distillée (10 mg par mL).<br> | ||
- | Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à - | + | Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.<br> |
Utiliser 1 µL de Carbénicilline pour 1 mL de solution.<br><br> | Utiliser 1 µL de Carbénicilline pour 1 mL de solution.<br><br> | ||
<b>Kanamycine:</b> Mettre 750 mg de Kanamycine dans 15 mL d'eau distillée (50 mg par mL).<br> | <b>Kanamycine:</b> Mettre 750 mg de Kanamycine dans 15 mL d'eau distillée (50 mg par mL).<br> | ||
- | Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à - | + | Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.<br> |
Utiliser 1 µL de Kanamycine pour 1 mL de solution.<br><br> | Utiliser 1 µL de Kanamycine pour 1 mL de solution.<br><br> | ||
<b>Chloramphénicole:</b> Mettre 525 mg de Chloramphénicole dans 15 mL d'éthanol (35 mg par mL).<br> | <b>Chloramphénicole:</b> Mettre 525 mg de Chloramphénicole dans 15 mL d'éthanol (35 mg par mL).<br> | ||
- | Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à - | + | Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.<br> |
Utiliser 25 µL de Chloramphénicole pour 1 mL de solution.<br><br> | Utiliser 25 µL de Chloramphénicole pour 1 mL de solution.<br><br> | ||
+ | La carbénicilline inhibe la synthèse de paroi bactérienne, la kanamycine interfère avec la traduction des ARNm et le chloramphénicole inhibe l'activité peptidyl transférase du ribosome.<br> | ||
- | <h2> LB | + | <h2> LB et LB Agar </h2> |
Mélanger 20 g de LB Broth avec 1L d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver. <br> | Mélanger 20 g de LB Broth avec 1L d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver. <br> | ||
Mélanger 17,5 g de LB Agar avec 500 mL d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver. <br> | Mélanger 17,5 g de LB Agar avec 500 mL d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver. <br> | ||
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- | <h2> CaCl2 | + | <h2> CaCl2 et CaCl2+glycérol </h2> |
<h2> Tris HCl (50 mL à 1M, pH=7,5)</h2> | <h2> Tris HCl (50 mL à 1M, pH=7,5)</h2> | ||
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Ajuster le pH avec du HCl concentré (~4 mL) jusqu'à pH=7,5.<br> | Ajuster le pH avec du HCl concentré (~4 mL) jusqu'à pH=7,5.<br> | ||
Compléter avec de l'eau distillée jusqu'à 50 mL puis mettre à autoclaver.<br> | Compléter avec de l'eau distillée jusqu'à 50 mL puis mettre à autoclaver.<br> | ||
- | Si la solution a une coloration jaune, recommencer avec du Trisbase de meilleur qualité. | + | Si la solution a une coloration jaune, recommencer avec du Trisbase de meilleur qualité.<br> |
Le TrisHCl est utilisé pour stocker l'ADN. | Le TrisHCl est utilisé pour stocker l'ADN. | ||
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Latest revision as of 14:47, 31 July 2013
Solutions, Milieux et boîtes de Pétri
Antibiotiques
Carbénicilline: Mettre 150 mg de Carbénicilline dans 15 mL d'eau distillée (10 mg par mL).Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.
Utiliser 1 µL de Carbénicilline pour 1 mL de solution.
Kanamycine: Mettre 750 mg de Kanamycine dans 15 mL d'eau distillée (50 mg par mL).
Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.
Utiliser 1 µL de Kanamycine pour 1 mL de solution.
Chloramphénicole: Mettre 525 mg de Chloramphénicole dans 15 mL d'éthanol (35 mg par mL).
Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.
Utiliser 25 µL de Chloramphénicole pour 1 mL de solution.
La carbénicilline inhibe la synthèse de paroi bactérienne, la kanamycine interfère avec la traduction des ARNm et le chloramphénicole inhibe l'activité peptidyl transférase du ribosome.
LB et LB Agar
Mélanger 20 g de LB Broth avec 1L d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver.Mélanger 17,5 g de LB Agar avec 500 mL d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver.
CaCl2 et CaCl2+glycérol
Tris HCl (50 mL à 1M, pH=7,5)
Dissoudre 4,6g de Trisbase dans 30 mL d'eau distillée.Ajuster le pH avec du HCl concentré (~4 mL) jusqu'à pH=7,5.
Compléter avec de l'eau distillée jusqu'à 50 mL puis mettre à autoclaver.
Si la solution a une coloration jaune, recommencer avec du Trisbase de meilleur qualité.
Le TrisHCl est utilisé pour stocker l'ADN.