Latest revision as of 14:47, 31 July 2013

Solutions, Milieux et boîtes de Pétri

Antibiotiques

Carbénicilline: Mettre 150 mg de Carbénicilline dans 15 mL d'eau distillée (10 mg par mL).
Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.
Utiliser 1 µL de Carbénicilline pour 1 mL de solution.

Kanamycine: Mettre 750 mg de Kanamycine dans 15 mL d'eau distillée (50 mg par mL).
Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.
Utiliser 1 µL de Kanamycine pour 1 mL de solution.

Chloramphénicole: Mettre 525 mg de Chloramphénicole dans 15 mL d'éthanol (35 mg par mL).
Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.
Utiliser 25 µL de Chloramphénicole pour 1 mL de solution.

La carbénicilline inhibe la synthèse de paroi bactérienne, la kanamycine interfère avec la traduction des ARNm et le chloramphénicole inhibe l'activité peptidyl transférase du ribosome.

LB et LB Agar

Mélanger 20 g de LB Broth avec 1L d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver.
Mélanger 17,5 g de LB Agar avec 500 mL d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver.

CaCl2 et CaCl2+glycérol

Tris HCl (50 mL à 1M, pH=7,5)

Dissoudre 4,6g de Trisbase dans 30 mL d'eau distillée.
Ajuster le pH avec du HCl concentré (~4 mL) jusqu'à pH=7,5.
Compléter avec de l'eau distillée jusqu'à 50 mL puis mettre à autoclaver.
Si la solution a une coloration jaune, recommencer avec du Trisbase de meilleur qualité.
Le TrisHCl est utilisé pour stocker l'ADN.

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-<h1 align='center'> Solutions, Milieux et boîte de Pétri </h1>
+<h1 align='center'> Solutions, Milieux et boîtes de Pétri </h1>
+<h2> Antibiotiques </h2>
+<b>Carbénicilline:</b> Mettre 150 mg de Carbénicilline dans 15 mL d'eau distillée (10 mg par mL).<br>
+Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.<br>
+Utiliser 1 µL de Carbénicilline pour 1 mL de solution.<br><br>
+<b>Kanamycine:</b> Mettre 750 mg de Kanamycine dans 15 mL d'eau distillée (50 mg par mL).<br>
+Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.<br>
+Utiliser 1 µL de Kanamycine pour 1 mL de solution.<br><br>
+<b>Chloramphénicole:</b> Mettre 525 mg de Chloramphénicole dans 15 mL d'éthanol (35 mg par mL).<br>
+Filtrer avec un filtre millipore 0,22 µm ,répartir dans des tubes de 2 mL et stocker à -4 °C.<br>
+Utiliser 25 µL de Chloramphénicole pour 1 mL de solution.<br><br>
+La carbénicilline inhibe la synthèse de paroi bactérienne, la kanamycine interfère avec la traduction des ARNm et le chloramphénicole inhibe l'activité peptidyl transférase du ribosome.<br>
+<h2> LB et LB Agar </h2>
+Mélanger 20 g de LB Broth avec 1L d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver. <br>
+Mélanger 17,5 g de LB Agar avec 500 mL d'eau distillée dans une bouteille de 1L puis mettre à autoclaver. <br>
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+<h2> CaCl2 et CaCl2+glycérol </h2>
+<h2> Tris HCl (50 mL à 1M, pH=7,5)</h2>
+Dissoudre 4,6g de Trisbase dans 30 mL d'eau distillée.<br>
+Ajuster le pH avec du HCl concentré (~4 mL) jusqu'à pH=7,5.<br>
+Compléter avec de l'eau distillée jusqu'à 50 mL puis mettre à autoclaver.<br>
+Si la solution a une coloration jaune, recommencer avec du Trisbase de meilleur qualité.<br>
+Le TrisHCl est utilisé pour stocker l'ADN.
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Team:Evry/Protocoles/04

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