Team:Evry/Notebook/w4

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But : On veut récupérer les séquences des promoteurs de gènes sous le contrôle du facteur de transcription FUR (Ferric Uptake Regulation) <br/><br/>;
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But : On veut récupérer les séquences des promoteurs de gènes sous le contrôle du facteur de transcription FUR (Ferric Uptake Regulation) <br/><br/>
On refait les PCR pour les échantillons qui ont échoué la semaine dernière.<br/>
On refait les PCR pour les échantillons qui ont échoué la semaine dernière.<br/>
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Les produits de PCR son ensuite déposés sur gel puis purifiés avant d'être dosé au Nanodrop.<br/>
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        <b>Fec C</b> (BG1655)<br/>
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        [c] = 34.2 ng/µl<br/>
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        260/280 = 1.91<br/>
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Revision as of 15:47, 28 July 2013

Iron coli project

Week 4: 8th July - 14th July

Monday, July 8th

We prepared the BL21 and BG1655 strains to be competent.

Tuesday, July 9th

Petri box Petri box

Both strain are not contaminated.

Petri box Petri box

BL21 are highly competent, BG1655 are little competent.

Wednesday, July 10th

PCR procedure optimization

But : Déterminer le nombre de matrice d'ADN optimal pour amplifier un gène par PCR

Données :

  • [primer] = --- ng/µl
  • taille (primer) = --- nt

Pour les PCR nous avons choisi d'utiliser --- ng de primer (V = --- µl). Connaissant la longueur de nos primer, nous avons pu déterminer le nombre de primer que nous utilisons lors de la réaction.
Grâce à la formule suivante nous avons déterminer le nombre de matrice à prélever en fonction de la concentration de l'échantillon.

AJOUTER LA FORMULE

Analyse des résultats sur gel d'agarose :

AJOUTER LA PHOTO LEGENDEE

Extraction de séquences de promoteurs naturels

But : On veut récupérer les séquences des promoteurs de gènes sous le contrôle du facteur de transcription FUR (Ferric Uptake Regulation)

On refait les PCR pour les échantillons qui ont échoué la semaine dernière.

  • Fec A
  • Ent C
  • Fec C
  • Ace B

Les produits de PCR son ensuite déposés sur gel puis purifiés avant d'être dosé au Nanodrop.

Fec A (BG1655)
[c] = 23.7 ng/µl
260/280 = 1.90

Fec A (BL21)
[c] = 53.1 ng/µl
260/280 = 1.73

Ent C (BG1655)
[c] = 52.4 ng/µl
260/280 = 1.71

Ent C (BL21)
[c] = 50.0 ng/µl
260/280 = 1.94

Ace B (BG1655)
[c] = 46.5 ng/µl
260/280 = 1.89

Fec C (BG1655)
[c] = 34.2 ng/µl
260/280 = 1.91

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